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Afiches Enfermedades Emergentes y Zoonóticas de Panamá

A­30 CRIOCONSERVACIÓN DE CEPAS DE
REFERENCIAS DE LEPTOSPIRA SPP. EN EL
LABORATORIO CENTRAL DE REFERENCIA EN SALUD
PÚBLICA DEL ICGES.

F Ruíz, D Moreno, Y Samudio, E Tejeira, L Samudio
A­30
Instituto Conmemorativo Gorgas de Estudios de la Salud

La conservación de bacterias del género Leptospira spp. requiere para su
mantenimiento, pases seriados en medios de cultivos EMJH (Ellinghausen­
McCollough­Johnson­Harris), incluyendo réplicas de cepas de cultivos,
descontaminación y demanda en cortos periodos de tiempo. Por lo que resulta
ser una labor costosa, rigurosa y requiere personal capacitado lo que puede
generar pérdidas de características genéticas, contaminación cruzada entre los
diferentes cultivos o pérdida de la antigenicidad. El objetivo de este estudio fue
estandarizar una técnica de crioconservación para el panel de referencia de
Leptospira spp. que cuenta con 18 serogrupos (utilizadas como antígeno para la
realización de la técnica de microaglutinación como método de confirmación)
pertenecientes a la sección de Parasitología y Malaria del Laboratorio Central de
Referencia en Salud Pública del ICGES. Metodología: Se utilizaron 18
serogrupos de cultivos puros con crecimiento entre 5 a 7 días en medio EMJH
evaluando su motilidad, esterilidad y densidad bajo el microscopio de campo
oscuro. Se evaluó la capacidad crioprotectora de tres agentes: el glicerol a una
concentración final de 1%, 2.5% y 5%. La leche descremada al 5%, mezcla de
glicerol con leche descremada y medio EMJH directo. Las mezclas del cultivo y
crioprotector fueron alicuotadas en volumen de 1ml sumergidas en un frasco con
alcohol a ­94º C y congeladas a ­70º C. La viabilidad de cada Serogrupo
crioconservada fue evaluada después de la descongelación (7, 14, 21 días) y
luego un seguimiento por un año, en cada evaluación se incluyó como control
de crecimiento un cultivo en medio EMJH de cada cepa no crioconservada. La
antigenicidad de cada cepa fue evaluada antes y después de la descongelación
con la técnica de microaglutinación. Conclusión: como resultado del presente
estudio se describe un método sencillo para la conservación a largo plazo para
los serogrupos de Leptospiras spp. a ­70º C con un apropiado agente
crioprotector en este caso el glicerol; que permitió estabilidad en viabilidad,
antigenicidad con el panel de 18 serogrupos de Leptospira spp.

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