Page 90 - Resúmen - XXV Congreso Latinoamericano de Parasitología - FLAP

CM-18

Prohibitinas, proteínas de t. Cruzi

Involucradas en la eliminación del estrés oxidativo

Antonio Osuna

Instituto Biotecnología, Grupo de Investigacion CTS 183, Bioquimica y Parasitología Molecular,
Universidad de Granada, Granada (España)

Las Prohibitinas 1 (PHB1) y 2 (PHB2) son dos proteínas homólogas, pertenecientes a la super familia
SPFH (Stomatin/Prohibitin/Flotillin/HflC). Ambas proteínas muestran un 41% de identidad en sus
secuencias aminoacídicas y ambas contienen el motivo PHB, también conocido como SPFH, próximo al
segmento transmembrana en el extremo N-terminal de las proteínas. La función de dicho motivo es
desconocida, aunque se encuentra conservado a lo largo de la escala evolutiva, desde procariotas a
eucariotas, incluyendo al hombre. Se han descrito miembros de la familia de las PHBs en distintas especies
y en diferentes localizaciones, encontrándolas principalmente en la membrana interna en la mitocondria,
el núcleo y la membrana plasmática, habiéndoseles relacionado con funciones como la proliferación
celular, envejecimiento, inflamación, apoptosis, estabilización del ADN mitocondrial, mantenimiento de la
integridad y biogénesis mitocondrial, entre otros. En el presente trabajo, tras obtener ambas proteínas
recombinantes y desarrollar anticuerpos, se ha descrito la localización de las PHBs mediante técnicas
inmunoquímicas por microscopía de fluorescencia y electrónica, pudiendo observar una localización
diferencial en las distintas formas. Asimismo, para determinar el papel de las PHBs en la biología de las
diferentes formas del parásito se han sobreexpresado dichas proteínas, a partir de constructos conteniendo
los genes phbs y el vector de expresión pTREX-TAPtag-GW. Tras lo que se concluye que ambas proteínas
participan en la captación y eliminación de especies reactivas de oxígeno (ROS), actuando a nivel
fisiológico del parásito, en la metaciclogénesis que sufren las formas Epimastigotas para generar formas
trypomastigotas metacíclicas así como en la multiplicación de las formas amastigotas intracelulares.
Mediante el sistema CRISPR/Cas9 se han obtenido líneas de los flagelados “knockout” para los genes
phb1 y phb2, de las cuales se ha conseguido una línea disminuida para la PHB1 y otra línea knockout
completa para la PHB2, demostrando que la falta del gen phb2 es letal para el parásito al producirse
alteraciones en la membrana mitocondrial del parásito.
Este trabajo ha sido financiado por los proyectos: ERA-NET UE ERANET, Instituto de Salud Carlos III,
Cofinanciado por el Fondo Europeo de Desarrollo Regional/Fondo Social Europeo. “Una manera de hacer
Europa”/ “El FSE invierte en tu futuro”, con las referencias ELAC2014/HID-0328 y ERANet17/HLH-0142
(Cochaco) titulados: “Research in prevention of congenital Chagas disease: parasitological, placental and
immunological markers". Y el proyecto “Interactoma de las exovesículas de Trypanosoma cruzi y de los
inmunocomplejos que forman con las células del hospedador: implicaciones en la patología de la
Enfermedad de Chagas” de la Fundación Ramón Areces, 2019 (Diálogo intercelular e interactoma:
implicaciones patológicas)

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